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龙图腾网获悉南京师范大学申请的专利一种RPA-Cas12a一锅法检测系统及其应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN116144814B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-04-21发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202310288775.2，技术领域涉及：C12Q1/689；该发明授权一种RPA-Cas12a一锅法检测系统及其应用是由黄和;王佩;杨莎;林蕾;张幸;李昺之设计研发完成，并于2023-03-22向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种RPA-Cas12a一锅法检测系统及其应用在说明书摘要公布了：本发明公开了一种RPA‑Cas12a一锅法快速检测系统及其应用，该系统包括RPA预混液和CRISPR‑Cas12a预混液；CRISPR‑Cas12a预混液包括ssDNA、Cas12a和crRNA；crRNA为基于次优PAM序列设计的能引导Cas12a靶向识别AHPNDRPA产物的特异性向导RNA序列。本发明设计了特异性crRNA，降低Cas12a的切割效率，使RPA扩增过程与CRISPR‑Cas12a特异性切割过程同时在一管中反应，避免了两步法中转移RPA扩增产物潜在的污染风险及繁琐步骤，灵敏度高、稳定性好，为水产养殖业提供了高灵敏度、高准确性、稳定性好、简便快捷的AHPND现场检测方法。

本发明授权一种RPA-Cas12a一锅法检测系统及其应用在权利要求书中公布了：1.一种RPA-Cas12a一锅法检测系统在制备重要水产养殖传染病肝胰腺坏死病的快速现场检测试剂中的应用；所述应用的方法为：将RPA预混液、Cas12a预混液和模板DNA加入RPABufferB混合在实时荧光定量PCR仪中进行一锅反应，进行荧光定量PCR，反应过程中采集FAM荧光信号，终点信号在紫外线下可见，并拍摄图像； 所述RPA预混液包括用于扩增RPA产物的正向引物RPA-F、反向引物RPA-R、RPABufferA和DEPC水；所述Cas12a预混液包括LbCas12a、10xNEBBuffer2.1、crRNA和ssDNA；所述ssDNA为两端分别修饰有荧光基团FAM和猝灭基团BHQ1的单链DNA；crRNA为基于次优PAM序列设计的能引导Cas12a靶向识别AHPNDRPA产物的特异性向导RNA序列； 所述RPA-F的序列为ATGAGCCAGATATTGAAAACATTTGGGAAC；所述RPA-R的序列为TAACTAAACCAATGTAATCATCTTTTGC； 所述ssDNA的序列为5’FAM-TTATT-3’BHQ1； 所述crRNA序列为UAAUUUCUACUAAGUGUAGAUAUUAAUGUCUUGAAUUUUAUC。

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