湘潭大学蔡昌群获国家专利权
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龙图腾网获悉湘潭大学申请的专利一种基于磷光共振能量转移用于特异性检测信使RNA的磷光生物传感器的制备及应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN117269120B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-04-21发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202210699281.9,技术领域涉及:G01N21/64;该发明授权一种基于磷光共振能量转移用于特异性检测信使RNA的磷光生物传感器的制备及应用是由蔡昌群;姚淑芬;赵晓佳;龚行设计研发完成,并于2022-06-20向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种基于磷光共振能量转移用于特异性检测信使RNA的磷光生物传感器的制备及应用在说明书摘要公布了:本发明提供了一种特异性检测信使RNA的磷光生物传感器的制备方法。在本发明中,利用聚多巴胺PDA与持久发光纳米粒子PL之间的磷光共振能量转移PRET构建了磷光生物传感器。该传感器包含了PDA粒子载体三种核酸链:一种是与目标物TK1mRNA互补结合的发夹链H,一种是与持久发光纳米粒子通过酰胺键结合的DNA链PL‑DNA,还有一种是与PL‑DNA互补的底物链S‑15A。无目标物时。PL的磷光被PDA吸收造成信号较弱;加入目标物后,目标物打开H,暴露出的柔性末端将PL‑DNA从S‑15A上置换下来,PL远离PDA造成PRET关闭,磷光信号回升,且磷光信号随着目标物浓度的增大而增强,在0‑200nM呈线性关系。此发明的检测限为1.74nM。
本发明授权一种基于磷光共振能量转移用于特异性检测信使RNA的磷光生物传感器的制备及应用在权利要求书中公布了:1.一种基于磷光共振能量转移用于特异性检测信使RNA的磷光生物传感器的制备方法,其特征在于以下合成步骤: 1将0.018g多巴胺溶解在9mL50oC超纯水中搅拌,再将76μL1.0MNaOH快速注入上述溶液,并在黑暗中缓慢搅拌5小时得到聚多巴胺纳米粒子; 2将1mL2M硝酸锌和0.005mM硝酸锰溶于10mL超纯水中,剧烈搅拌后向上述溶液中300μLHNO3,并缓慢滴加1mL1M的锗酸钠前体溶液,前体溶液为NaOH与二氧化锗以2:1的物质的量混合至透明,使用氨水将pH调至9.5,在室温下搅拌1小时后在高压反应釜中220oC反应4小时得到持久发光纳米粒子PL; 3取25mg2中材料PL与10mL5mMNaOH混合超声分散均匀后剧烈搅拌过夜,离心收集固体分散在N,N-二甲基甲酰胺中,剧烈搅拌下加入200μL3-氨丙基三乙氧基硅烷,在80oC下反应24小时得到氨基修饰的持久发光纳米粒子PL-NH2; 4向350μLpH5.0的酸性的三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲体系加入50μL10μM的1-乙基3-二甲基氨基丙基碳酰二亚胺和50μL2μM的羧基修饰的DNA链I-DNA,在37oC下震荡1小时活化羧基;随后,向上述溶液中加入50μL5mgmL的N-羟基丁二酰亚胺在37oC继续震荡反应4小时,洗涤后重悬于250μLTris-HCl缓冲液中得到1mgmL的DNA修饰的持久发光纳米粒子PL-DNA, I-DNA序列为: 5’-CCCCAATCCCCAATCCCCATCCCCCCAGG-3’,其中5’端修饰羧基; 4取10μL1mgmL1中材料PDA与20μL10μM发夹链H和底物链S-15A以1:1的比例混合,在室温下震荡1小时后离心得到DNA负载的聚多巴胺探针PDA-DNA;随后,将100μL1mgmL的PL-DNA加入到上述固体中,在37oC孵育1小时,离心后重悬于100μLTris-HCl缓冲液中得到磷光生物传感器, H序列为: 5’-AAAAAAAAAATCTTTCCAGGGAGAACAGAAAACAGATATCTGTTCTCCCTGGGGGGATGG-3’, S-15A序列为: 5’-AAAAAAAAAAAAAAAGGGGATGGGGTTTTTGGATTGG-3’,加粗部分为聚A序列,用于负载在PDA表面。
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