东华大学李静超获国家专利权
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龙图腾网获悉东华大学申请的专利一种用于特异性基因治疗的光激活型CRISPR高分子纳米载体的制备方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119842052B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-04-21发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202411575906.6,技术领域涉及:C08G61/12;该发明授权一种用于特异性基因治疗的光激活型CRISPR高分子纳米载体的制备方法是由李静超;刘玥;张璠设计研发完成,并于2024-11-06向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种用于特异性基因治疗的光激活型CRISPR高分子纳米载体的制备方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种用于特异性基因治疗的光激活型CRISPR高分子纳米载体的制备方法,包括:CRISPR高分子纳米载体的制备方法,稳定的聚合物‑DNA载体的制备,聚合物‑DNA‑sgRNA的制备,有机高分子纳米载体性能验证,有机高分子纳米载体在细胞层面的性能和疗效验证,有机高分子纳米载体在动物层面的性能和疗效验证。本纳米载体制备的条件温和,安全可靠,并且可以利用NIR光响应型纳米载体实现对CRISPRCas9递送和活性的精准调控,实现sgRNA的释放,并具有较好的抗肿瘤效果。
本发明授权一种用于特异性基因治疗的光激活型CRISPR高分子纳米载体的制备方法在权利要求书中公布了:1.一种用于特异性基因治疗的光激活型CRISPR高分子纳米载体的制备方法,其特征在于,包括如下步骤: 步骤S1:称取50mg单体1、45mg单体2、4mg双三苯基磷二氯化钯、4mg三邻甲基苯基磷溶于5mL无水氯苯中在100℃下剧烈搅拌10min,完成后过滤混合物,用甲醇进行索氏抽提净化,得到SPBr;所述单体1为2,6-二溴-4,4-双6-溴己基-4H-环戊并[2,1-b:3,4-b]二噻吩;所述单体2为4,7-双5-三甲基甲锡烷基-2-噻吩基-2,1,3-苯并三唑; 步骤S2:称取12mgSPBr和3mg叠氮化钠溶于6mL四氢呋喃和3mL的N,N-二甲基甲酰胺的混合溶液中,在室温下搅拌24h;将粗产物溶于二氯甲烷,用盐水洗涤3次,然后收集到烧瓶中,真空干燥,得到聚合物SPN3; 步骤S3:称取8mgSPN3和40mgDNBS-PEG溶于4mL四氢呋喃,通过三次真空-氩气循环填充氩气,混合物在室温、黑暗的氩气环境下搅拌12h;在减压下去除THF后,将得到的粗产物溶于水,透析后冻干,得到最终产物SPNH; 步骤S4:取1mgSPNH和4OD单链DNA溶于2mL超纯水中,用浓度为10mmol的盐酸溶液调节pH=6,室温下搅拌24h后超滤洗涤,得到对照纳米体系,记为SPND; 步骤S5:将步骤S4中所得溶液中加入4OD的向导RNA,用水浴锅在95℃加热2min,再进行降温,最后降温到25℃,循环5次后超滤洗涤,即得到了用于特异性基因治疗的光激活型CRISPR高分子纳米载体,记为SPNDRG; 与SPNH中向导RNA互补的ssDNA的序列为:AGCACAATTTGCCGTAGGTA与SPNDRG中向导RNA互补的ssDNA的序列为CCGGTGTTCAAGTCGCACAG以及反应体系的最适pH=6。
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