中山大学附属第六医院文卫平获国家专利权
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龙图腾网获悉中山大学附属第六医院申请的专利一种基于凝集素亲和的血清糖基化流式分析方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN116359510B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-04-28发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202310211689.1,技术领域涉及:G01N33/68;该发明授权一种基于凝集素亲和的血清糖基化流式分析方法是由文卫平;陈骏雄;涂召旭;杨湘玲;向南霖;刘焕亮设计研发完成,并于2023-03-07向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种基于凝集素亲和的血清糖基化流式分析方法在说明书摘要公布了:本发明属于糖基化检测分析技术领域,具体涉及一种基于凝集素亲和的血清糖基化流式分析方法。本发明通过耦合了诱饵分子的聚苯乙烯微球富集待测样品中的目的分子,再与荧光标记的凝集素孵育后直接通过流式细胞仪分子目的分子的糖基化信息。由于本发明在聚苯乙烯微球上偶联靶向蛋白的诱饵分子富集目标蛋白,聚焦目的蛋白进行后续分析,可有效缩小视域,提高特异性;同时凝集素与目的蛋白结合后直接进行流式细胞术荧光分析,可有效减少洗涤操作对凝集素亲和力的破坏,进而克服了凝集素与糖链亲和力弱的缺点,而且仅需少量样品可实现多种凝集素分析,并可实现免洗实时分析,为利用凝集素分析糖基化提供了新的途径,具有重要的潜在应用价值。
本发明授权一种基于凝集素亲和的血清糖基化流式分析方法在权利要求书中公布了:1.一种基于凝集素亲和的血清糖基化流式分析方法,其特征在于,先采用EDC和EDC交联反应基团将诱饵分子共价交联于聚苯乙烯微球上制成诱饵微珠,所述诱饵分子含有伯胺基团-NH2,然后再将诱饵微珠与待测样品以及凝集素荧光探针在结合缓冲液中进行共孵育,最后利用流式细胞仪直接读取诱饵微珠的荧光信号,从而体现凝集素的亲和丰度,通过凝集素与糖基化的对应关系,得出靶分子的糖基化修饰情况; 所述基于凝集素亲和的血清糖基化流式分析方法具体包括以下步骤: S1、将聚苯乙烯微球悬浮液与EDC和EDC交联反应基团混匀,于分子杂交仪中反应1-3h;所述聚苯乙烯微球为羧化聚苯乙烯微珠,所述EDC交联反应基团为sulfo-NHS; S2、除去上清后重悬微球,加入诱饵分子4℃避光孵育过夜,再除去上清重悬微球后制得诱饵微珠;所述诱饵分子为Protein-AGL; S3、在结合缓冲液中加入诱饵微珠、待测样品以及凝集素荧光探针,混匀后于分子杂交仪中分子杂交孵育1-2h;所述凝集素荧光探针包括ConA、DBA、PNA、RCA-1、SBA、UEA-1、WGA、DSL、ECL、GSL-Ⅱ、Jacalin、LEL; S4、孵育后利用流式细胞仪进行分析,FSCSSC圈选微球,分析平均荧光强度,通过凝集素与糖基化的对应关系,得出靶分子的糖基化修饰情况。
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