北京肿瘤医院(北京大学肿瘤医院)詹启敏获国家专利权
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龙图腾网获悉北京肿瘤医院(北京大学肿瘤医院)申请的专利一种细胞内mRNA传感器开关的DNA文库筛选方法及应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN121344095B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-04-28发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202511892498.1,技术领域涉及:C12N15/85;该发明授权一种细胞内mRNA传感器开关的DNA文库筛选方法及应用是由詹启敏;王嫣;刘思齐设计研发完成,并于2025-12-16向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种细胞内mRNA传感器开关的DNA文库筛选方法及应用在说明书摘要公布了:本发明提供一种细胞内mRNA传感器开关的DNA文库筛选方法及应用。该DNA文库筛选方法包括如下步骤:设计一含有兼并碱基的开关序列的DNA文库;制备一环状表达载体文库;制备最小化线性表达载体文库;无缝克隆;RCA滚环扩增;端粒酶酶切;细胞转染;提取RNA和反转录;以cDNA为模板进行二代测序的建库;二代测序;分析数据进行比对,得到mRNA传感器开关的DNA文库。本发明提供的DNA文库筛选方法可以为细胞内mRNA上单一位点提供更多传感器开关序列,进一步为后续的靶向治疗提供更多的选择可能。
本发明授权一种细胞内mRNA传感器开关的DNA文库筛选方法及应用在权利要求书中公布了:1.一种细胞内mRNA传感器开关的DNA文库筛选方法,其特征在于,包括如下步骤: 1设计一含有兼并碱基的开关序列DNA文库 该开关序列由5’端序列、中间区域序列、3’端序列组成;其中,5’端序列与3’端序列的长度均为84nt,5’端序列与3’端序列分别与靶mRNA的序列互补; 中间区域序列是长度为27nt的可变序列,该中间区域序列从5’端到3’端以9个三联体密码子形式表示为5’-FOZFOZFOZFOZTAGFOZFOZFOZFOZ-3’,其中,F为密码子第一位碱基,O为密码子第二位碱基,Z为密码子第三位碱基; 84nt的5’端序列与84nt的3’端序列分别与靶mRNA的编码链DNA序列互补后,该中间区域序列位置匹配对应的靶mRNA编码链DNA上的序列从3’端到5’端以9个三联体形式表示为3’-fozfozfozfozaccfozfozfozfoz-5’; 其中,f为A时,F为T;f为T时,F为A;f为C时,F为G;f为G时,F为C; o为A时,O为K;o为T时,O为N;o为C时,O为B;o为G时,O为N; z为A时,Z为K;z为T时,Z为N;z为C时,Z为B;z为G时,Z为N; 其中,兼并碱基K为G或T;兼并碱基S为G或C;兼并碱基N为A、T、C或G;兼并碱基B为G、T或C; 化学合成该含有兼并碱基的开关序列DNA文库; 当所述开关序列的所述84nt的5’端序列和所述84nt的3’端序列中出现与所述27nt的中间区域序列的TAG终止密码子属于同一阅读框的终止密码子TAG、TGA或TAA,则所述5’端序列和所述3’端序列中相应的TAG修改为TCG,TGA修改为GGA,TAA修改为TCA; 2制备一环状表达载体文库; 3制备最小化线性表达载体文库; 4无缝克隆; 5RCA滚环扩增; 6端粒酶酶切; 7细胞转染; 8提取RNA和反转录; 9以cDNA为模板进行二代测序的建库; 10二代测序; 11分析数据进行比对,得到mRNA传感器开关的DNA文库; 根据二代测序结果进行序列比对,在表达目标mRNA的细胞中的开关序列和不表达目标mRNA的细胞中的开关序列中去掉共有序列之后,找到表达目标mRNA的细胞和不表达目标mRNA的细胞中除了中间TAG的A位置以外完全一样的序列,并选出在表达目标mRNA的细胞中TAG变成TGG的序列,且在不表达目标mRNA的细胞中不存在TAG变成TGG现象的序列,即得到mRNA传感器开关的DNA文库。
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