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龙图腾网获悉上海金福康制药工程技术有限公司申请的专利基于甲基化敏感限制性内切酶的文库污染特异性降解方法及试剂盒获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN120738328B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-05-05发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202511262406.1，技术领域涉及：C12Q1/6806；该发明授权基于甲基化敏感限制性内切酶的文库污染特异性降解方法及试剂盒是由刘骁;王海波;贾志臣;骆奕晨;郭品;周芷俊设计研发完成，并于2025-09-05向国家知识产权局提交的专利申请。

本基于甲基化敏感限制性内切酶的文库污染特异性降解方法及试剂盒在说明书摘要公布了：本申请涉及一种基于甲基化敏感限制性内切酶的文库污染特异性降解方法及试剂盒。所述方法包括：确定甲基化敏感限制性内切酶的识别位点、酶切文库污染物、片段纯化、验证与质控等，其中在所述酶切文库污染物步骤中，将所述文库反应体系在35°C‑39°C的温度下孵育0.5‑1.5小时，随后在60°C‑70°C的温度下孵育15‑25分钟，以获得酶切后的DNA文库反应体系。本申请的方法可选择性去除未甲基化的DNA，而对高甲基化状态的DNA几乎无影响，避免了非特异性降解，从而有效提升目标片段的纯度。

本发明授权基于甲基化敏感限制性内切酶的文库污染特异性降解方法及试剂盒在权利要求书中公布了：1.一种基于甲基化敏感限制性内切酶的文库污染特异性降解方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤： 1确定甲基化敏感限制性内切酶的识别位点：所述甲基化敏感限制性内切酶包括HpaII和HinP1I； i获取所述宿主DNA和所述目标DNA的甲基化数据； ii根据所述甲基化数据确定甲基化差异位点； iii从所述甲基化差异位点中筛选出所述甲基化敏感限制性内切酶的识别位点； 其中，所述甲基化差异位点通过公式M=log2β+α1-β+α进行确定，其中，M为甲基化强度，β为甲基化比例，α为防止分母为零的平滑因子，且α的取值范围为0.001至0.01；所述甲基化差异位点的筛选条件为：在≥90%的正常组织中Δβ≥0.70，β_target≥0.75，β_host≤0.15； 2酶切文库污染物：配制DNA文库反应体系，其中所述DNA包括宿主DNA和目标DNA；加入所述甲基化敏感限制性内切酶至所述DNA文库反应体系中并进行孵育，然后获得酶切后的DNA文库反应体系； 3片段纯化：使用磁珠法选择性纯化所述酶切后的DNA文库反应体系，获得纯化DNA文库，其中所述纯化DNA文库中的DNA片段大于200bp； 4验证与质控：使用扩增和测序检测所述纯化DNA文库中的宿主DNA去除率以及目标DNA保留率； 其中，所述目标DNA包括人类基因组DNA，所述甲基化敏感限制性内切酶的识别位点为如下位点： chr11：2,180,310-2,180,313； chr6：22,146,094-22,146,097； chr17：7,845,201-7,845,204； chr1：48,616,494-48,616,497； 所述位点的参考基因选自UCSC数据库的hg38。

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