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龙图腾网获悉青岛农业大学;内蒙古草业技术创新中心有限公司申请的专利一种快速筛选紫花苜蓿高效gRNA的方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN121160690B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-05-05发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202511692214.4，技术领域涉及：C12N15/10；该发明授权一种快速筛选紫花苜蓿高效gRNA的方法是由张昆;于爱灵;杜敏;丛丽丽;苑峰;刘亚玲;贾世朕;王增裕;弓晓楠;贾磊设计研发完成，并于2025-11-18向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种快速筛选紫花苜蓿高效gRNA的方法在说明书摘要公布了：本发明属于基因工程技术领域，更具体地，涉及一种快速筛选紫花苜蓿高效gRNA的方法。所述方法具体为：将紫花苜蓿幼苗子叶酶解提取并纯化得到原生质体，将包含待筛选gRNA的基因编辑载体导入原生质体后培养30h得到基因编辑后的原生质体，提取基因编辑后的原生质体的基因组DNA，通过PCR扩增待筛选gRNA靶位点的核苷酸序列并进行高通量测序，筛选出高效gRNA。该方法解决了现有技术中gRNA靶点基因编辑体系评价周期长、效率低的问题。

本发明授权一种快速筛选紫花苜蓿高效gRNA的方法在权利要求书中公布了：1.一种快速筛选紫花苜蓿高效gRNA的方法，其特征在于，包括以下步骤： S1、将紫花苜蓿种子灭菌后接种于培养基上，春化后25℃暗培养4d得到幼苗，将幼苗子叶粉碎后用纤维素酶和离析酶进行酶解，所得产物混匀过滤后得到滤液，150g离心纯化滤液得到原生质体； 酶解的条件为25℃，12h； S2、重悬原生质体得到原生质体悬液，将浓度为1×105g-1FW的原生质体悬液、基因编辑载体溶液和PEG溶液混合，25℃静置诱导转化15min，随后终止反应，离心后重悬，于黑暗条件下31℃培养30h得到基因编辑后的原生质体；所述基因编辑载体中包含待筛选gRNA； 基因编辑载体的启动子为紫花苜蓿来源的MsU6-38启动子，所述MsU6-38启动子的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示； 所述原生质体悬液、基因编辑载体和PEG溶液的体积比为10：1：11； S3、提取基因编辑后的原生质体的基因组DNA，通过PCR扩增待筛选gRNA靶位点的核苷酸序列并进行高通量测序，分析不同gRNA的编辑效率，从而筛选出编辑效率最高的gRNA； 编辑效率最高的gRNA的核苷酸序列如SEQIDNO.13所示。

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